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Baculovírus recombinantes contendo genes de proteases são mais virulentos contra Spodoptera Frugiperda

by Welzel, Aline

Abstract (Summary)
Os baculovírus são vírus de DNA, específicos de artrópodes, possuindo uma ampla utilização, principalmente, como bioinseticida em lepidópteros e como vetores deexpressão de genes heterólogos. A habilidade do vírus Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus (AcMNPV) de infectar um grande número de hospedeiros temfacilitado estudos moleculares desse vírus com o objetivo de melhorar sua propriedade bioinseticida. Este trabalho teve por objetivo a construção de AcMNPV recombinantescom a introdução de um gene de uma protease (catepsina-L) e de uma quitinase no genoma viral, para a observação dos efeitos da infecção viral em larvas de Spodopterafrugiperda, comparativamente aos vírus AcMNPV selvagem e outro AcMNPVrecombinante, contendo o gene de uma serino-protease (queratinase) de Aspergillusfumigatus. Outro objetivo do trabalho foi a construção de Anticarsia gemmatalismultiple nucleopolyhedrovirus (AgMNPV) recombinantes com a introdução dos genesdas proteases catepsina-L e queratinase no genoma viral. Foram utilizados os vetores detransferência pSynXIVVI+X3 e p2100, respectivamente, para cada vírus. O DNAplasmidial dos vetores de transferência recombinantes foi co-transfectado com o DNAdo vírus vSyngalVI- e do vAgGalA2, em células de Trichoplusia ni (BTI-Tn5B1-4) eAnticarsia gemmatalis (UFL-AG-286), respectivamente. Os isolamentos dos vírusrecombinantes foram feitos com a técnica de diluição seriada em placa de 96 poços e adetecção dos vírus recombinantes se deu pela observação de poliedros nas célulasinfectadas por meio da microscopia de luz. O vírus AcMNPV recombinante contendo ogene da catepsina-L (vSynCAT) assim como o AcMNPV recombinante contendo ogene da queratinase (vSynQUERAT) foram mais virulentos contra larvas de 3° e 4°instar de S. frugiperda quando comparados aos vírus selvagem e o vírus AcMNPV recombinante contendo o gene da quitinase (vSynQUIT). Além disso, os vírusvSynCAT e vSynQUERAT induziram a melanização da cutícula dos insetos nosestágios mais tardios da infecção. Os AgMNPV recombinantes ainda não foramisolados e, desta forma, não foi possível analisar o efeito desses genes no genoma dobaculovírus mais utilizado como bioinseticida no mundo.
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Bibliographical Information:

Advisor:Bergmann Morais Ribeiro; Tatsuya Nagata; Maria Elita Batista de Castro; Silene de Paulino Lozzi

School:Universidade de Brasília

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:BIOLOGIA MOLECULAR

ISBN:

Date of Publication:03/23/2006

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