Caracterização imunoquímica e molecular da fração dermonecrótica do veneno da aranha marrom Loxosceles intermedia

by de Moura, Juliana Ferreira

Com o objetivo de investigar a bioquímica e a imunoquímica de proteínas presentes no veneno de L. intermedia, treze anticorpos monoclonais foram produzidos e, um deles, denominado LimAb7, foi capaz de neutralizar a atividade dermonecrótica induzida por esta peçonha em coelhos. Para caracterizar as proteínas reconhecidas poreste anticorpo monoclonal, diferentes técnicas foram empregadas como, por exemplo, eletroforese bidimensional, ensaios de neutralização das atividades hemolíticas e esfingomielinásicas, técnica de Spot-synthesis, Phage display e imunosseleção de uma biblioteca de cDNA da glândula do veneno de L. intermedia. Através de um Western Blotting feito a partir de um gel bidimensional do veneno bruto de L. intermedia, verificou-se que LimAb7 reconheceu, pelo menos, 15 proteínas que fazem parte da família das proteínas da fração dermonecrótica. Além disso, foi capaz de inibir 84 % e 63,5% das atividades hemolíticas e esfingomielinásicas induzidas pelo veneno, in vitro, respectivamente. Quanto à técnica de Phage display, todos os mimotopos selecionados pelo LimAb7 apresentaram uma porção hidrofílica flanqueada por duas cisteínas, alguns dados sugerem que este anticorpo monoclonal apresenta efeito neutralizante pelaligação a um determinante antigênico dependente de conformação. Neste trabalho, ainda foram identificadas duas seqüências de aminoácidos a partir de uma biblioteca de cDNA da glândula de veneno de L. intermedia. A análise das mesmas revelou que as proteínasdeduzidas, ambas com 283 aminoácidos, são isoformas que apresentam 46 e 47,5% de similaridade com a LiD1. As massas moleculares das proteínas são de 32.036 e 32.180 Da e seus pontos isoelétricos teóricos 6.36 e 5.94, respectivamente.