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Solubilização e efeito de tapsigargina em Ca2+-ATPase de larva de Pachymerus nucleorum (Fabricius 1792) (Coleoptera: Chrysomelidae: Bruchinae)

by Duarte, Vinícius Luis

Abstract (Summary)
CAPITULO I: Pachymerus nucleorum Fabricius 1792 é uma espécie de besouro predadorde castanhas de babaçu (Orbignya sp.) pertencente à subfamília de coleópterosBruchinae, cujos representantes são conhecidos como broc as de sementes. Umafração precipitada (P3) obtida a paritr de larva de P. nucleorum e não solubilizadacom Triton X100 apresentou atividade Ca2+-ATPásica e K+/EDTA-ATPásica. Opresente trabalho teve como objetivo solubilizar a enzima responsável pela ativ idadeATPásica e caracterizá-la. A atividade Ca2+-ATPásica foi parcialmente solubilizadacom NaCl 600 mM e a análise em SDS-PAGE mostrou a presença mais marcantede um polipeptídeo com mobilidade relativa de 205 kDa, e mais fracamente um de130 kDa e um de 102 kDa. NaCl 600 mM inibiu cerca de 40% da atividade de P3,chegando a 84% com NaCl 2M. A atividade Mn2+-ATPásica da fração solubilizadarepresentou cerca de 40% da Ca2+-ATPásica, e não foi detectada atividade Mg2+-ATPásica. Em presença de zinco ou ferro oxidado, a atividade ATPásica foi nula equando incubada com cobalto, cobre, bário, lítio ou ferro reduzido, a atividadecorrespondeu a menos de 20% da Ca2+-ATPásica. A atividade Ca2+-ATPásica foicompletamente inibida por magnésio, cobre e zinco. Cobalto, manganês, ferro(oxidado e reduzido) inibiram em mais de 60% tal atividade, e bário ou lítio nãoafetaram a atividade dependente de cálcio. Neste trabalho, a atividade Ca2+-ATPásica de larva de Pachymerus nucleorum foi parcialmente solubilizada comNaCl 600 mM e apresentou atividade Ca2+-ATPásica inibida por magnésio. CAPITULO II: Ca2+-ATPases são ATPases envolvidas no transporte de cálcio através demembranas. As Ca2+-ATPases de retículo sarcoplasmático e endoplasmático sãoirreversivelmente inibidas por concentrações micromolares de tapsigargina. Oobjetivo deste trabalho foi testar o efeito de tapsigargina na atividade Ca2+-ATPásicaisolada a partir de larva de Pachymerus nucleorum, um besouro pertencente àsubfamília Bruchinae. As larvas de P. Nucleorum foram homogeneizadas, e a fraçãoprecipitada (fração P3) não solubilizada com Triton X-100 e pirofosfato, foi utilizadapara os testes de inibição por tapsigargina. Tapsigargina 140 amp;#956;M inibiu cerca de80% e 95% da atividade Ca2+-ATPásica da fração P3, quando adicionada no inícioou 5 minutos antes de iniciar reação, respectivamente. Pré-incubação com ATP oucálcio preveniu parcialmente a inibição da atividade Ca2+-ATPásica por tapsigargina,assim como pré-incubação na presença de ATP e cálcio. Os resultados mostradosneste trabalho sugerem que a ATPase isolada de larva de P. Nucleorum trata-se deuma Ca2+-ATPase.
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Bibliographical Information:

Advisor:Milton Vieira Coelho; Hérica de Lima Santos; Márcia Rosângela Wink

School:Universidade Federal de Uberlândia

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:Solubilização

ISBN:

Date of Publication:02/28/2007

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