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Expressão e purificação de uma proteína multiepítopo recombinante desenhada a partir de proteínas do vírus da hepatite C

by Oliveira Castro, Marielle de

Abstract (Summary)
A hepatite C é considerada um dos maiores problemas de saúde pública nomundo inteiro, inclusive no Brasil, pois uma vacina preventiva não está disponível, onúmero de infectados com a forma assintomática é elevado e para o controle da doença,há somente kits importados. Considerando, principalmente, o aumento da preocupaçãocom a detecção precoce da hepatite C e que os métodos de diagnóstico desta infecçãosão de grande relevância clínica, o presente trabalho propõe a expressão e purificação deuma proteína codificada por um gene sintético (MEHCV ? Multiepítopo HCV). Paraatingir este objetivo, uma proteína multiepítopo recombinante foi desenhada a partir deepítopos lineares, imunodominantes e filogeneticamente conservados do vírus dahepatite C (HCV), com a inclusão de seqüências imunodominantes dos genótipos maisprevalentes no Brasil (1a e 3a) e uma His-tag no C-terminal para facilitar a purificaçãoda proteína recombinante expressa em bactéria. Estes epítopos (core, NS3, NS4A,NS4B e NS5) são considerados entre os mais importantes para o diagnóstico da doençae utilizados em muitos testes para detecção do HCV. O gene MEHCV (~720pb) possuisítios de restrição (NdeI e XhoI) nas suas extremidades que permitem a clonagem emfase no vetor de expressão bacteriano pET-21a. Para a síntese deste gene, foi feita aotimização para o códon usage de E. coli. A proteína de interesse (~29kDa) foidetectada por SDS-PAGE e Western blot. A purificação da proteína expressa foirealizada por cromatografia de afinidade em resina Ni-NTA. Como a purificação não foitotal, foi feita uma nova purificação desta proteína por cromatografia de afinidade emcoluna com resina Ni-NTA. No entanto, não houve esta purificação devido à presençade proteínas celulares. Sendo assim, na tentativa de alcançar a purificação total destaproteína multiepítopo, seria interessante a utilização de um novo protocolo, com aextração dos corpos de inclusão, onde todas as proteínas celulares solúveis seriamretiradas da solução.
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Bibliographical Information:

Advisor:IRMTRAUT ARACI HOFFMANN PFRIMER; Fernando Araripe Gonçalves Torres

School:Universidade Católica de Goiás

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:proteína multiepítopo hepatite ciencias da saude

ISBN:

Date of Publication:03/23/2007

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