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Purificação e caracterização de uma nova fosfolipase A2 ácida da peçonha de Bothrops pauloensis

by Rodrigues, Renata Santos

Abstract (Summary)
As fosfolipases A2 (PLA2) são pequenas enzimas que apresentam massa molecular emtorno de 15kDa e são encontradas em uma variedade de fluídos biológicos e celulares,como fluido sinovial, macrófagos, plaquetas, secreção pancreática, dentre outros. Opresente trabalho descreve a purificação e caracterizações químicas, biológicas eenzimáticas de uma fosfolipase A2 ácida da peçonha de Bothrops pauloensis. A novafosfolipase A2 foi denominada BP-PLA2, esta enzima foi purificada por cromatografia detroca iônica em CM-Sepharose Fast Flow seguido por cromatografia hidrofóbica em PhenylSepharose CL-4B e finalizando em cromatografia de fase reversa RP-HPLC em coluna C8.BP-PLA2 consiste em uma proteína de 15.8kDa e ponto isoelétrico de 4.34. A sequência Nterminalda enzima revelou uma significante homologia com as Asp-49 ácidas de outraspeçonhas de serpentes nos primeiros quinze aminoácidos. A atividade catalítica da BPPLA2foi de 315 U/mg, mostrando um aumento considerável da atividade PLA2 e foi capazde induzir alta atividade hemolítica indireta nos diferentes intervalos de tempo. Afosfolipase A2 ácida foi capaz de inibir a agregação plaquetária na presença de colágeno,fato não ocorrido quando esta foi incubada com ADP. Apresentou uma atividadeedematogênica bastante pronunciada em pata de camundongos. BP-PLA2 induziu efeitosmiotóxicos, sendo a caracterização realizada por dosagem de creatina cinase (CK) eanálises morfológicas. Estes estudos indicaram um aumento dos níveis de creatina quinaseplasmáticos no tempo de 1 hora e as análises histológicas indicaram que a PLA2 induziu umintenso edema, com evidente infiltrado leucocitário e dano nas células musculares após 24horas de injeção da toxina.
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Bibliographical Information:

Advisor:Luiz Ricardo Goulart Filho; Veridiana de Melo Rodrigues Ávila; Andreimar Martins Soares

School:Universidade Federal de Uberlândia

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:Peçonha

ISBN:

Date of Publication:02/28/2006

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