Purificação e caracterização de uma nova fosfolipase A2 ácida da peçonha de Bothrops pauloensis

by Rodrigues, Renata Santos

As fosfolipases A2 (PLA2) são pequenas enzimas que apresentam massa molecular emtorno de 15kDa e são encontradas em uma variedade de fluídos biológicos e celulares,como fluido sinovial, macrófagos, plaquetas, secreção pancreática, dentre outros. Opresente trabalho descreve a purificação e caracterizações químicas, biológicas eenzimáticas de uma fosfolipase A2 ácida da peçonha de Bothrops pauloensis. A novafosfolipase A2 foi denominada BP-PLA2, esta enzima foi purificada por cromatografia detroca iônica em CM-Sepharose Fast Flow seguido por cromatografia hidrofóbica em PhenylSepharose CL-4B e finalizando em cromatografia de fase reversa RP-HPLC em coluna C8.BP-PLA2 consiste em uma proteína de 15.8kDa e ponto isoelétrico de 4.34. A sequência Nterminalda enzima revelou uma significante homologia com as Asp-49 ácidas de outraspeçonhas de serpentes nos primeiros quinze aminoácidos. A atividade catalítica da BPPLA2foi de 315 U/mg, mostrando um aumento considerável da atividade PLA2 e foi capazde induzir alta atividade hemolítica indireta nos diferentes intervalos de tempo. Afosfolipase A2 ácida foi capaz de inibir a agregação plaquetária na presença de colágeno,fato não ocorrido quando esta foi incubada com ADP. Apresentou uma atividadeedematogênica bastante pronunciada em pata de camundongos. BP-PLA2 induziu efeitosmiotóxicos, sendo a caracterização realizada por dosagem de creatina cinase (CK) eanálises morfológicas. Estes estudos indicaram um aumento dos níveis de creatina quinaseplasmáticos no tempo de 1 hora e as análises histológicas indicaram que a PLA2 induziu umintenso edema, com evidente infiltrado leucocitário e dano nas células musculares após 24horas de injeção da toxina.