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Purificação, imobilização e avaliação de propriedades biológicas da lectina da entrecasca de Crataeva tapia

by Sousa de, Regina Maria

Abstract (Summary)
Lectinas são proteínas ou glicoproteínas de origem não imune cuja ligaçãoreversível e específica a carboidratos resulta em aglutinação celular. Estas proteínas,presentes em bactérias, invertebrados, vertebrados e plantas são detectadas por ensaio dehemaglutinação. Crataeva tapia L. pertence à família das Capparaceae. Uma lectina deentrecasca de C. tapia, CrataBL, foi purificada à homogeneidade através de fracionamentocom sulfato de amônio (Fração 30-60%), seguida por cromatografia de troca iônica (CMCelulose).CrataBL aglutinou eritrócitos de humanos, galinha e coelho (atividadehemaglutinante específica, AHE, 102) e principalmente inibida por glicoproteínas. CrataBLfoi termoestável e tratamento com EDTA não afetou a atividade hemaglutinante (AH);atividade não foi alterada após adição de Ca2+, Mn2+, Mg2+ e após tratamento com asenzimas proteolíticas tripsina e quimiotripsina sua AH manteve-se estável. CrataBL migroucomo uma única banda após eletroforese para proteínas nativas básicas e duas bandaspolipeptídicas de massas moleculares 21.000 e 40.000 Da após SDS-PAGE com ou semagente redutor; os polipeptídeos foram também detectados usando reagente paraglicoproteína e sua porção carboidrato foi estimada em 12,8%. A natureza glicoprotéica deCrataBL foi também revelada por sua interação com lectina glicose/manose em gel deagarose. A massa molecular da lectina por cromatografia de filtração em gel foi de 40.000Da. CrataBL imobilizada em Sepharose CL-4B adsorveu bioseletivamente caseína, fetuína,ovoalbumina e isolou glicoproteínas de plasma sanguíneo humano. O efeito da lectina nacoagulação sanguínea foi avaliado através do tempo de tromboplastina parcial ativada(TTPA), tempo de protrombina (TP) e tempo de trombina (TT). CrataBL apresentouatividade anticoagulante somente na via intrínseca, onde o TTPA apresentou-se prolongado (dose-dependente) a partir de uma concentração de 1,25 amp;#956;g da lectina. CrataBL apresentoutoxicidade para Artemia salina com LC50 de 71,7 amp;#956;g/mL. A atividade antitumoral deCrataBL (20 mg/kg) foi avaliada utilizando Sarcoma 180 implantado em camundongosalbinos Swiss (Mus muscullus) e foi detectada por redução do peso do tumor de 50,7%. Aatividade antiinflamatória de CrataBL foi avaliada pelo modelo de edema de pata induzidopor carragenina e a lectina apresentou efeito antiinflamatório significativo evidenciado pelaredução (35,4%) do número de neutrófilos no exsudato inflamatório. CrataBL tambémapresentou atividade analgésica reduzindo em 34,8% o número de contorções induzidas porácido acético
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Bibliographical Information:

Advisor:Patrícia Maria Guedes Paiva; Luana Cassandra Breitenbach Barroso Coelho; Vera Lúcia de Menezes Lima; Maria Tereza dos Santos Correia

School:Universidade Federal de Pernambuco

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:Purificação de lectinas Imobilização Coagulação sanguínea Atividade antitumoral antiinflmatória e analgésica

ISBN:

Date of Publication:07/30/2008

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