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Identificação e caracterização de biomarcadores teciduais e sorológicos no câncer de mama por Phage Display

by de Sousa, Cristina Soares

Abstract (Summary)
CAPITULO II: O câncer de mama é uma das principais causas de morte em mulheres eainda não existem medidas específicas de prevenção primária. A detecçãoprecoce é o objetivo principal, visando à diminuição da mortalidade e aumento dasobrevida. Nesse trabalho foi utilizada a técnica de Phage Display para isolarpeptídeos ligantes às proteínas do tecido câncer de mama para obtenção debiomarcadores que possam ser utilizados no diagnóstico e tratamento dessapatologia. Para seleção desses peptídeos foi realizado um Bioppaning subtrativo,no qual duas bibliotecas de peptídeos Ph.D.-7 e Ph.D.-12 expressas nasuperfície de fago filamentoso M13 foram colocadas primeiramente em contatocom proteínas de tecido de mama normal, para que os fagos ligantes a proteínasdo tecido normal fossem eliminados nessa etapa, e depois foram submetidas atrês ciclos de seleção. O DNA dos fagos selecionados foi seqüenciado etraduzido. As seqüências peptídicas selecionadas foram analisadas porbioinformática e pelas técnicas ELISA, dot-blotting, wertern-blotting eimunohistoquímica para confirmar o sucesso da estratégia de seleção e parafornecer novos subsídios quanto aos prováveis alvos biológicos. A análiseimunohistoquímica foi realizada com seis dos fagos selecionados (BC04, BC05,BC07, BC11, BC12, BC17) em câncer de mama e com a mistura de três deles(BC11, BC12, BC17), em câncer de mama, câncer de ovário, linfoma não-hodgkine melanoma. Todos os fagos selecionados apresentaram alto grau de informaçãoe Razão do Indice ELISA acima de 1, o que é considerado significativo. Tanto emDot-blotting quanto em wertern-blotting, os fagos se ligaram apenas a proteínasdo tumor. Na imunohistoquímica pode-se observar marcação apenas de célulastumorais. A mistura de fagos reconheceu proteínas do câncer de mama, câncerde ovário e linfoma maligno não-Hodgkin e não reconheceu proteínas domelanoma. Três fagos selecionados, BC04, BC05 e BC07 marcaramespecificamente a parede vascular de células tumorais. Os fagos selecionadosnesse trabalho podem, em um futuro próximo, ser utilizados como biomarcadoresteciduais, podendo ajudar tanto no diagnóstico, quanto no tratamento do câncerde mama. O elevado grau de informação de cada peptídeo selecionado obtidopelas análises de bioinformática e os resultados obtidos nos testes ELISA, Dotblotting,Western-blotting e imunohistoquímica validam os dados de bioppaningsubtrativo e comprovam a eficiência da técnica de Phage Display. CAPITULO III: No Brasil, o câncer de mama é a patologia maligna mais frequente napopulação feminina e tem o seu quadro agravado pelo fato do diagnóstico serestabelecido, na maioria das vezes, em fase tardia da doença. Nesse trabalho foiutilizada a técnica de Phage Display para isolar peptídeos ligantes às proteínas dosoro de mulheres com câncer de mama para obtenção de biomarcadores quepossam ser utilizados no diagnóstico sorológico dessa patologia. Para seleçãodos peptídeos foi realizado um bioppaning subtrativo utilizando uma biblioteca depeptídeos Ph.D.-12 expressa na superfície do fago filamentoso M13. A bibliotecade fagos foi colocada, primeiramente, em contato com soro de mulheresclinicamente sadias, depois em contato com soro de mulheres com doençasbenignas de mama, e por último, em contato com soro de mulheres com câncerde mama, para que os fagos ligantes a proteínas do soro de mulheres sem apatologia ou com doença benigna fossem eliminados. O DNA dos fagosselecionados foi seqüenciado e as seqüências analisadas por bioinformática. Astécnicas ELISA e dot-blotting foram utilizadas para confirmar o sucesso daseleção. Todos os clones analisados apresentaram Razão do Índice ELISA maiordo que um e alto grau de informação. A seqüência IETYESTHQSPP foi a maisfrequente e apresentou alta reatividade nas análises de dot-blotting com IgGs dosoro de pacientes com câncer de mama. Os clones T03, T18 e T09 apresentaramsimilaridade com a Ubiquitina e os clones T06, T19, T04, T10, T11, T14, T17 commotivos Zinc Finger. O fato de diferentes clones apresentarem similaridade paraum mesmo tipo de proteína sugere que diferentes motivos de uma mesmaproteína podem ser epítopos reconhecidos por autoanticorpos ou que essesmotivos estejam interagindo com proteínas associadas ao câncer de mama, vistoque o bioppaning foi feito com soro total.
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Bibliographical Information:

Advisor:Luiz Ricardo Goulart Filho; Marco Antonio Arap; Veridiana de Melo Rodrigues Ávila; Warwick Estevam Kerr; José Cláudio Casali da Rocha; Ana Maria Bonetti

School:Universidade Federal de Uberlândia

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:Câncer de mama Mama -

ISBN:

Date of Publication:02/16/2007

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