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Construção e avaliação da rLTB/SM14 : uma quimerarecombinante candidata a uma vacina contra esquistossomose efasciolose

by da Hora, Vanusa Pousada

Abstract (Summary)
A esquistossomose, causada por Schistosoma mansoni, é a segunda doença parasitáriamais prevalente no mundo causando doença crônica em milhões de pessoas em paísesem desenvolvimento. Semelhantemente, a fasciolose, causada pelo trematódeo Fasciolahepatica, representa um reconhecido problema agrícola responsável por perdaseconômicas assim como causa um significante número de infecções em humanos portodo mundo. Embora a quimioterapia para ambos os parasitas esteja disponível, elatem apresentado limitações, incluindo altas taxas de reinfecção em áreas endêmicas.Vacinas representam a alternativa mais atraente para inverter este cenário. Assim, aOrganização Mundial da Saúde selecionou a proteína ligadora de ácidos graxos 14kDade S. mansoni (Sm14) como uma de duas candidatas à vacina anti-esquistossomoseprioritárias para triagem clínica em humanos. Além disso, a Sm14 é a única proteínacandidata a vacina que induz imunidade protetora significativa contra ambos oshelmintos acima mencionados. O objetivo deste estudo foi desenvolver e avaliar emcamundongos uma vacina de subunidade contendo a Sm14 fusionada com asubunidade B da enterotoxina termolábil de Escherichia coli (LTB), a qual é um potenteimunoadjuvante; além disso, foi descrever a produção e caracterização de anticorposmonoclonais (MAbs) contra a Sm14 para usa-los como uma ferramenta para detectar ecaracterizar a Sm14 e para o desenvolvimento de futuro teste diagnóstico. Os genes ltbe sm14 foram amplificados por PCR a partir do DNA de E. coli e do plasmídeopAESm14, respectivamente, e fusionados por PCR. A quimera recombinante foiexpressa em E. coli e purificada por cromatografia de afinidade em coluna com níquel.Grupos de camundongos suíços não singênicos foram imunizados por via subcutâneacom três doses de rLTB/Sm14, rLTB/Sm14 mais hidróxido de alumínio (Al(OH)3), rSm14plus Al(OH)3, rLTB ou Al(OH)3. Os níveis de proteção foram determinados através donúmero de parasitas recuperados após desafio com cercárias de S. mansoni. O pool desoros dos camundongos imunizados foi avaliado por ELISA e Western blot. Osresultados mostraram que a proteína quimera foi capaz de estimular a produção deanticorpos específicos para Sm14 e LTB, contudo o uso de LTB como adjuvante paraimunização de rSm14 falhou em aumentar a proteção contra o desafio. Além disso, seteMAbs foram obtidos após imunização de um camundongo BALB/c com rLTB/Sm14. Aisotipagem dos MAbs revelou que cinco foram do isotipo IgG1, um pertencente aoisotipo IgG2b e outro ao isotipo IgM. Estes MAbs serão úteis para monitorar aexpressão da proteína em sistemas recombinantes, a estabilidade protéica e pode terpotencial para desenvolver teste diagnóstico.
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Bibliographical Information:

Advisor:Odir Antônio Dellagostin; José Antonio Guimarães Aleixo; Fabio Pereira Leivas Leite; Fabrício Rochedo Conceição

School:Universidade Federal de Pelotas

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords: Esquistossomose Vacina Anticorpos monoclonais PARASITOLOGIA

ISBN:

Date of Publication:10/30/2006

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