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Caracterização dos receptores P2 em eosinófilos de ratos e possíveis papéis funcionais.

by Pinto Alberto, Anael Viana

Abstract (Summary)
O ATP e outros nucleotídeos podem ser liberados das células parao meio extracelular, através de mecanismos regulados ou pela perda daintegridade da membrana. Uma vez no meio extracelular, os nucleotídeosatuam via receptores P2, um grupo de receptores que abrange duas famílias:os receptores P2X que são canais iônicos ativados por ligantes e os receptoresP2Y que são receptores acoplados à proteína G. Esses receptores foramcaracterizados em diversas células do sistema imune de rato. Contudo, não hána literatura nenhuma caracterização descrita em eosinófilos. Estes sãoimportantes por estarem envolvidos na asma e em diversos processospatológicos e fisiológicos. Por isso, fomos investigar a expressão dosreceptores P2 nessas células, usando técnicas de eletrofisiologia, análise davariação de cálcio e imunofluorescência. Na primeira etapa do nosso trabalho,procuramos investigar a expressão de receptores P2X (ionotrópico) poreletrofisiologia. Através da amplitude da corrente máxima normalizada,obtivemos a seguinte ordem de potência: ATPgt; ATPamp;#947;Sgt; 2meSATPgt; ADPgt;amp;#945;amp;#946;meATPgt; amp;#946;amp;#947;meATPgt; BzATPgt; UTPgt; UDPgt; cAMP, sugerindo a presença dosreceptores P2X2, P2X4 e P2X7. Nos experimentos de análise de variação decálcio intracelular obtivemos a seguinte ordem de potência: UTPgt; ATPamp;#947;S gt;ADP gt; UDPgt; ATP gt; BzATP gt;2meSATP gt; amp;#945;amp;#946;meATP gt; cAMP gt;Adenosina gt;amp;#946;amp;#947;meATP, sugerindo a presença de P2X1, P2X2 e P2X4, P2Y1, P2Y2 e P2Y4.Na imunofluorescência verificamos a expressão dos receptores P2Y2, P2Y4 eP2Y13. A partir dessa caracterização, fomos investigar a participação dessesreceptores na migração, in vitro, dos eosinófilos em sistema de transwell eobservamos que o ATP foi capaz de induzir maior migração dos mesmos.Esse efeito foi bloqueado pela suramina um antagonista geral dos receptoresP2. Além disso, empregamos o modelo de pleurisia alérgica em ratos paraverificar se os receptores P2 poderiam estar implicados na migração doseosinófilos para algum sítio de inflamação. Nossos resultados mostraram que asuramina diminuiu o número de células na cavidade pleural, indicando aparticipação de receptores P2, na resposta inflamatória. Nossos resultadosdemonstraram que eosinófilos de rato expressam receptores P2X e P2Y e quexiia ativação desses receptores pode aumentar a migração de eosinófilos in vitroe in vivo.
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Bibliographical Information:

Advisor:Luiz Anastácio Alves

School:Faculdades Oswaldo Cruz

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:Eosinófilos Imunofluorescência Migração IMUNOLOGIA Animais

ISBN:

Date of Publication:

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