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Construção de uma biblioteca de anticorpos (scFv)apresentada em fagos para seleção, análise e caracterização de antígenos do carrapato bovino (Boophilusmicroplus)

by Lino de, Guilherme Rocha

Abstract (Summary)
CAPÍTULO I:A amplificação de fragmentos scFv (fragmentos variáveis de cadeia única)de animais imunizados é um importante método na geração de anticorposmonoclonais. Neste trabalho galinhas foram imunizadas com proteínas totais dasfases larval e adulta (teleóginas) do carrapato bovino Boophilus microplus para ageração de uma biblioteca combinatorial de anticorpos anticarrapato. RNA total debaço destes animais foram extraídos e reações de amplificação (PCR) foramfeitas utilizando iniciadores específicos das regiões variáveis dos anticorpos coma finalidade de obter toda a variabilidade do repertório imune na construção dabiblioteca. Cinco ciclos de seleção (biopanning) foram feitos para captura dosclones scFv reativos às proteínas totais de larvas e teleóginas. A afinidade dosclones às proteínas totais do carrapato bovino foi confirmada por imunoensaio(ELISA) demonstrando um aumento da afinidade dos clones ao ligante ao longodos cinco ciclos de seleção. O sequenciamento dos clones do quinto ciclodemonstrou uma predominância de clones idênticos tanto para a bibliotecaconstruída utilizando proteínas de larvas, quanto para proteínas de teleóginas. Osanticorpos recombinantes scFv foram utilizados para seleção e caracterização deepítopos miméticos à proteínas do carrapato bovino para utilização comoimunógenos no controle deste parasita.CAPÍTULO II:Uma biblioteca de anticorpos scFv recombinantes apresentada em fagosfilamentosos foi utilizada para análise e caracterização de alvos protéicos contra ocarrapato bovino. Uma proteína com alta similaridade a proteína GP80, similar avitelina, uma abundante proteína encontrada nos ovos de parasitas adultos elarvas, foi reconhecida pelos anticorpos (Fragmentos scFv) nos testes de westernblot e sua seqüência foi determinada por sequenciamento N-terminal. Os mesmosclones foram utilizados para seleção de epitopos, em uma biblioteca de peptídeosconstrita de sete resíduos flanqueados por duas cisteínas (C7C) expressos emfagos, para obtenção de peptídeos miméticos às proteínas de carrapato. Oresultado obtido foi confirmado com a identificação, pelo Fragmento scFv, demotivos protéicos (GP80 e outras proteínas definidas como promissoresimunógenos como receptores de serotonina, antígeno B de membrana e outras),expressos na biblioteca de peptídeos recombinantes C7C. A vitelina e outrasproteínas já descritas por alguns autores como sendo promissores antígenosvacinais, aqui neste experimento aparecem melhor caracterizada, com regiõesimunogênicas reconhecidas por afinidade ao anticorpo recombinante gerado porphage display. Os resultados demonstram a eficiência da utilização de bibliotecasscFv na seleção de novos alvos protéicos contra o carrapato bovino.
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Bibliographical Information:

Advisor:Andrea Queiroz Maranhao; Luiz Ricardo Goulart Filho; Foued Salmen Espindola; Matias Pablo Juan Szabó; José Miguel Ortega

School:Universidade Federal de Uberlândia

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:Anticorpo Biblioteca de anticorpos peptídeos

ISBN:

Date of Publication:04/30/2007

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