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Caracterização de loci com variação alélica no genoma deLeishmania braziliensis passíveis de uso em testes diagnósticos e em estudos epidemiológicos

by Sousa, Rosana Santos

Abstract (Summary)
A leishmaniose tegumentar americana (LTA) é uma doença infecciosacausada pela L. braziliensis no estado da Bahia, Brasil. Esta espécie apresenta umalto grau de variabilidade genética, o qual é acompanhado por um amplo espectro demanifestações clínicas de doença. Um estudo prévio realizado com parasitosisolados de pacientes provenientes de uma área endêmica demonstrou que apopulação de L. braziliensis era multiclonal e formada por diferentes clados, os quaisforam associados a desfechos clínicos específicos. Neste estudo pretendeu-seidentificar a variação alélica em fragmentos de DNA gerados através de três perfiseletroforéticos de RAPD (ABI-04, A8 e ABI-18). Usamos seis isolados de L.braziliensis provenientes de clados distintos e amplificamos dois deles para cadaprotocolo de RAPD. A partir dos perfis obtidos, submetemos seis bandas distintas aoseqüenciamento (ABI-04: bandas B1 e B2; A8: bandas B1, B2, B3; e ABI-18: bandaB1). Das 24 reações submetidas, 22 foram seqüenciadas com sucesso. Asseqüências geradas a partir de cada protocolo de RAPD separadamente e entre ospares de isolados foram alinhadas e comparadas quanto à: (a) identidade aoconteúdo de nucleotídeos, caracterizando-as como loci homólogos; (b) a presençade polimorfismos; e (c) a natureza dos polimorfismos detectados. Constatamos queas seqüências provenientes das duas bandas correspondentes ao protocolo RAPDABI-04 e das três bandas para o protocolo RAPD A8 tiveram em torno de 90% deidentidade, que corresponderam a loci homólogos com alguma variação alélica. Ospolimorfismos detectados foram 97 SNPs, 227 indels e 08 microsatélites. Tambémanalisamos as seqüências para os potenciais sítios de digestão com enzima derestrição para obtenção de sítios polimórficos que poderiam ser usados nodesenvolvimento de um método de discriminação baseado no RFLP, e encontramoscerca de 120 sítios diferentes entre os nove loci. Futuramente, as variações alélicasidentificadas entre esses loci podem ser úteis para o desenvolvimento deferramentas epidemiológicas e diagnósticas com valor prognóstico sobre asinfecções humanas
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Bibliographical Information:

Advisor:Nicolaus Albert Borges Schriefer

School:Universidade Federal da Bahia

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:Leishmaniose Polimorfismo genético Variação alélica IMUNOLOGIA

ISBN:

Date of Publication:10/31/2006

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