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Expressão gênica de células do microambiente tímico: modificaçõesfenotípicas e funcionais após inativação do gene CD49e por interferência de RNA.

by Lacerda, Leandra Linhares

Abstract (Summary)
O timo é um órgão linfóide central onde precursores derivados da medula óssea sofrem um complexo processo de maturação que ocorre à medida que os timócitos migram nomicroambiente tímico, uma rede tridimensional composta de diferentes tipos celulares. Estas células microambientais interagem com timócitos, provendo sinais que regulam odesenvolvimento intratímico normal de células T. Estes sinais são liberados em nichos do microambiente tímico, nos quais um determinado tipo celular apresenta um padrão desinalização específico, e influenciam determinados estágios específicos de diferenciação/migração dos timócitos.Em nosso trabalho, identificamos genes diferencialmente expressos entre células epiteliais tímicas corticais e medulares. Alguns genes fazem parte da regulação neuroendócrina doepitélio tímico, como por exemplo, timopoietina e receptores hormonais; outros, VCAM e fibronectina, participam da adesão e migração de timócitos no microambiente tímico. A identificação de tais genes contribui para o entendimento dos sinais fornecidos por nichos microambientais aos timócitos em desenvolvimento. Estes sinais geram a comunicaçãotimócito/microambiente que é bilateral (conceito de cross-talk), o que implica que a interação com o timócito deva modular a expressão gênica no epitélio tímico. De fato, experimentosde microarranjos de DNA mostraram que tal interação gerou uma modulação de 114 genes nas células epiteliais corticais, 142 genes nas células medulares de camundongo e ainda,mais de 350 genes em células epiteliais humanas.Para aprofundar os conhecimentos sobre as interações timócito/epitélio tímico mediadas por proteínas de matriz extracelular (ECM) e seus receptores, fizemos o silenciamento do gene codificante para a molécula CD49e (cadeia alfa-5 de um dos receptores de fibronectina, a integrina VLA-5) nas células epiteliais tímicas humanas, através de interferência de RNA (RNAi). Vimos que o silenciamento deste gene modula a expressão gênica de outras moléculas relacionadas à interação com timócitos. De fato, pelo menos 150 genes sãomodulados no próprio epitélio tímico após tratamento com RNAi. Por fim, demonstramos que o silenciamento gênico da cadeia amp;#945;5 integrina pela estratégia de siRNAs leva a umadiminuição significativa da adesão dos timócitos às TECs.Em seu conjunto, mostramos nesta tese que as interações de timócitos com o epitélio tímico promovem uma grande modulação gênica nas células epiteliais. Além disso, demonstramos que a inibição do receptor de fibronectina no epitélio tímico leva a uma modulação gênicanas próprias células epiteliais, com conseqüências sobre as interações com timócitos.
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Bibliographical Information:

Advisor:Wilson Savino

School:Faculdades Oswaldo Cruz

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords: Interferência de RNA Células Epiteliais Expressão Gênica Matriz Extracelular

ISBN:

Date of Publication:04/10/2008

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