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Análise de seqüências de minicírculos do kDNA obtidos de amostras clínicas (lesões ativas e cicatrizadas) de pacientes com leishmaniose tegumentar americana em Pernambuco, Brasil

by Gomes Rodrigues, Eduardo Henrique

Abstract (Summary)
Algumas espécies do gênero Leishmania sp. são agentes causadores das leishmanioses, que representam um grave problema de saúde pública no mundo. Entre estas, a leishmaniose tegumentar americana causada por Leishmania (Viannia) braziliensis possui como apresentação clínica lesões cutâneas que cicatrizam espontaneamente ou após tratamento. No presente estudo, abordagens moleculares in vitro e in silico foram utilizadas para analisar o genoma mitocondrial, mais particularmente em 290 minicírculos inteiros do kDNA de Leishmania sp. obtidos de amostras clínicas (lesões ativas e cicatrizadas) de pacientes com leishmaniose tegumentar americana enfocando particularidades ainda desconhecidas. Este trabalho demonstra que os minicírculos seqüenciados e devidamente alinhados apresentam polimorfismos de tamanho variando de 518 pb a 797 pb e de seqüência, caracterizando grande heterogeneidade de classes, particularmente no grupo portador de lesões ativas. As seqüências de minicírculos a partir de cicatrizes puderam ser agrupadas em um ?cluster?, indicando um certo grau de homogeneidade, possivelmente devido ao processo de seleção clonal. A análise composicional de todas as seqüências de minicírculos estudadas mostrou percentuais de A + T em cerca de 70%. Seqüências palindrômicas foram identificadas e mapeadas em dois clones mostrando uma superioridade na combinação de bases formadas por A e T localizada na região variável de minicírculos. Motivos com repetições diretas alternadas formadas por TA, AT, TT e AA perfizeram 55% destas seqüências. Cinqüenta e cinco microsatélites polimórficos foram mapeados em regiões conservadas e variáveis. O mapeamento de motivos palindrômicos, das repetições diretas alternadas e microsatélites não mostraram características discriminativas entre minicírculos obtidos de cicatrizes ou lesões ativas, parecendo serem características estruturais genéricas. Motivos específicos foram identificados e mapeados dentro de regiões conservadas e variáveis de minicírculos do kDNA de acordo com a maior freqüência encontrada em cada uma delas em ativos e cicatrizados. Comparando-se palavras idênticas nos grupos de lesões, constata-se que as maiores freqüências apresentadas estão no grupo de minicírculos obtidos de cicatrizes. Em conclusão, as abordagens moleculares empregadas permitiram descrever algumas características moleculares nos minicírculos que parecem ser comuns a essa espécie molecular, e por outro lado, as classes de minicírculos amplificados de cicatrizes apresentam seqüências mais similares, a se julgar pelas análises com alinhamento múltiplo e cladograma, possivelmente devido à predominância de determinados motivos. Seria interessante, no futuro, identificar com clareza quais as regiões das seqüências de minicírculos que são responsáveis pelas diferenças genéticas entre os minicírculos obtidos de cicatrizes e lesões ativas. Um particular interesse foi dado às regiões codificando gRNA, haja vista que tipos diferentes de gRNA podem ser essenciais à sobrevivência da Leishmania no contexto biológico do tecido cicatrizado ou lesões ativas. As possíveis conseqüências biológicas desses achados, no contexto da persistência parasitária, precisam, contudo, de investigações adicionais para maior esclarecimento.
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Bibliographical Information:

Advisor:Octavio Fernandes da Silva Filho; Frederico Guilherme Coutinho Abath

School:Faculdades Oswaldo Cruz

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:Leishmaniose cutânea Polimorfismo (Genética) Análise de Sequência DNA BIOLOGIA MOLECULAR

ISBN:

Date of Publication:04/20/2006

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