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Aplicação de polímeros como matrizes no desenvolvimento de biossensores e na purificação de proteínas

by Frade de, Rosângela Ferreira

Abstract (Summary)
Atualmente, vários estudos têm sido direcionados à tentativa de melhoramento do desempenho dos biossensores. Os polímeros condutores e não condutores têm sido utilizados tanto no aprimoramento dos diferentes modos de transdução de sinais biológicos quanto na disponibilização de grupos químicos para imobilização de biomoléculas. Neste trabalho, a utilização do polímero quitosana depositado sobre ouro para imobilização de imunoglobulinas G foi avaliada a partir do método de ELISA e através de um biossensor piezoelétrico, o qual é composto por uma microbalança de cristal de quartzo. Com a presença do polímero, absorbâncias três vezes mais altas foram obtidas e a alteração na freqüência de ressonância do cristal após a imobilização dos anticorpos aumentou de 14.19% (±2.43) para 24.34% (±0.75). A prata epoxy, polímero condutor, foi utilizada na fabricação de eletrodos de trabalho para construção de um biossensor amperométrico para detecção de lactato desidrogenase. Outros compostos como grafite e tetracianoquinodimetano também foram utilizados na composição da pasta condutora. Na voltametria cíclica, com NADH e glutaraldeído adsorvidos na superfície do eletrodo, uma corrente anódica foi gerada em 0.5V na presença da lactato desidrogenase e piruvato devidoà oxidação eletroquímica do NADH. Os eletrodos mostraram ser reproduzíveis nas condições eletrolíticas testadas apresentando boa sensibilidade (1.5amp;#956;A (U/L)-1). Entretanto,o potencial encontrado pode levar a uma baixa seletividade do biossensor em decorrência da oxidação de espécies interferentes presentes no soro. A enzima lactato desidrogenase foi pré-purificada a partir de sistemas bi- fásicos aquosos compostos de citrado de sódio e polietilenoglicol que é um polímero inerte. Um planejamento fatorial foi utilizado nas análises estatísticas e a massa molecular do polímero foi a variável que apresentou maiorinfluência sobre o fator de purificação e rendimento da lactato desidrogenase. A enzima apresentou o maior fator de purificação de 7.9, com rendimento de 100% de sua atividade
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Bibliographical Information:

Advisor:José Luiz de Lima Filho

School:Universidade Federal de Pernambuco

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:Purificação

ISBN:

Date of Publication:01/01/2006

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