Details

Expressão de cinco diferentes proteínas de interessefarmacológico em sementes transgênicas de soja [GlycineMax L. (Merril)]

by da Cunha, Nicolau Brito

Abstract (Summary)
As plantas superiores representam um sistema conveniente e versátil para a produção em larga escala de proteínas heterólogas. A confirmação desse potencial tem sidodemonstrada pelo sucesso comercial de sistemas de produção desses polipeptídeos, baseados na transformação genética das mais variadas espécies vegetais, resultandoatualmente na produção eficiente de mais de 100 diferentes proteínas heterólogas. Uma porcentagem significativa desse conjunto de polipeptídeos recombinantes engloba aquelascujo interesse farmacológico e terapêutico se mostra evidenciado em função das propriedades bioquímicas apresentadas por essas moléculas, tais como hormônios, fatores de crescimento, anticorpos e fatores de coagulação sangüinea. Biorreatores vegetais apresentam inúmeras vantagens em relação a outros sistemas de produção de biofármacos recombinantes, principalmente no que diz respeito à praticidade, economia e segurança, apesar de algumas limitações envolvendo homogeneidade do produto, baixa estabilidade protéica e baixos níveis de expressão ainda se mostrarem recorrentes. Dessa maneira a escolha de plantas de soja [Glycine max L.(Merril)] como veículos de expressão de biofármacos de interesse comercial visa não apenas contornar algumas dessas dificuldades como também aproveitar características extremamente favoráveis para sua utilização como biorreatores de fármacos protéicos, tais como sua baixa freqüência de alogamia, ausência de parentes silvestres no Brasil e seu potencial natural de acúmulo protéico nas sementes, através de uma estratégia de expressão tecido-específico e de endereçamento moleculardesses polipeptídeos para prolongamentos dos retículos endoplasmáticos de células cotiledonares das sementes, denominados corpos protéicos. Para tanto, foram construídosdiferentes cassetes de expressão em nosso laboratório contendo cinco seqüências codificadoras de biofármacos com atividade efetora em humanos e de considerável impactosocial: a pró-insulina, o hormônio de crescimento e o fator IX de coagulação sangüínea humanos; e fragmentos de anticorpos anti-câncer de mama e anti-reperfusão pósisquêmica, sob controle do promotor tecido-específico de sementes da ?-faseolina do feijoeiro-comum (Phaseolus vulgaris L.) ? a mais abundante nas sementes de feijão; alémdo peptídeo-sinal da ?-coixina de Coix (Coix lacrima-jobi L.), responsável pelo endereçamento dos polipeptídeos para os corpos protéicos cotiledonares. Após a clonagem dos cassetes de expressão foram obtidas diferentes linhagens transgênicas de soja através do processo de biobalística e análises moleculares e bioquímicas foram realizadas paraavaliar o número de cópias dos diferentes transgenes integradas ao genoma de cada linhagem, a segregação dos transgenes em sucessivas gerações de multiplicação desementes em casa de vegetação, os níveis de expressão dos transgenes, a cinética química de expressão ao longo do ciclo de produção de sementes e a localização subcelular doacúmulo de proteínas heterólogas nas sementes.
This document abstract is also available in English.
Bibliographical Information:

Advisor:Natália Cristina Verza Ferreira; Octavio Luiz Franco; Elibio Leopoldo Rech Filho

School:Universidade Católica de Brasília

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:fator de coagulação sangüínea hormônio crescimento humano biorreatores vegetais soja transgênica soja, ? melhoramento genético; insulina; hormônios Ciências Biológicas

ISBN:

Date of Publication:02/29/2008

© 2009 OpenThesis.org. All Rights Reserved.