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Identificação de atividades ATPásica e Amilásica em larvas de Pachymerus nucleorum (Fabricius, 1792) (Coleoptera:Chrysomelidae: Bruchinae)

by Freitas Lacerda, Rogério de

Abstract (Summary)
RESUMO GERAL - Atividades enzimáticas do tipo ATPásica e Amilásica foram detectadas emlarvas do coleóptero Pachymerus nucleorum (Fabricius, 1792), uma espécie debesouro incluída na sub-família Bruchinae, da família Chrysomelidae e praga dococo babaçu (Orbinya spp). A atividade ATPásica foi isolada por fracionamentocom sulfato de amônio, de extratos do corpo gorduroso e atividade amilásica foiextraída por solubilidade em tampão de intestino das larvas. Essas atividadesforam parcialmente caracterizadas por SDS-PAGE, zimograma, e por parâmetroscinéticos como temperatura, efeitos de íons metálicos, efeitos de ativadores. Osresultados mostraram uma atividade ATPásica mais ativa na presença de íonsMg2+ e Co2+. Observou-se maior atividade na presença de ATP e leve inibição porvanadato. A atividade amilásica foi levemente ativada por sacarose, apresentoutemperatura ótima a 50ºC e foi ativada em torno de 20% por íons cálcio e por NaCla concentrações 0,5 e 14 mM, respectivamente. As atividades caracterizadaspodem ser importantes para determinar estratégias para o controle dessa pragado coco da palmeira do babaçu.RESUMO - CAPÍTULO I -Pachymerus nucleorum (Fabricius, 1792) é uma espécie de coleóptero dasub-família Bruchinae, família Chrysomelidae, que possui como principalhospedeiro a palmeira babaçu (Orbinya spp). O objetivo deste trabalho foiidentificar e caracterizar atividade ATPásica em larvas de P. nucleorum. Oaparelho digestivo das larvas de P. nucleorum foi retirado e o corpo gorduroso foihomogeneizado, imediatamente, em tampão imidazol 50 mM pH 7,5 contendoinibidores de protease (Aprotinina 0,2 µg/mL e Benzamidina 1 mM), sacarore 250mM e EDTA 1 mM e centrifugado a 15000xg por 30 minutos a 4 ºC. A fração S1 foifracionada com sulfato de amônio a 20 % de saturação. A fração precipitada (P2)foi ressuspendida em tampão Imidazol pH 8,0 contendo EDTA 1 mM e ?-mercaptoetanol 0.2 mM e centrifugado. A fração P3 foi tratada com ATP 10 mM eMgCl2 5 mM, e centrifugada. A fração P4 apresentou atividades Mg-ATPásica eCo-ATPásica e os principais polipeptídios desta fração possuem Mr em torno de180, 54, 43 e 17 kDa. Cálcio ou cálcio/calmodulina não estimularam a atividadeMg-ATPásica, e não foi detectado atividade K-EDTA-ATPásica. A atividade Mg-ATPásica não foi estimulada por outros cátions e foi levemente inibida porvanadato. A atividade Mg-GTPásica foi cerca de 50% da atividade Mg-ATPásica.RESUMO - CAPÍTULO II - Pachymerus nucleorum (Fabricius, 1792) é uma espécie de besouro dasub-família Bruchinae, família Chrysomelidae e cujo principal hospedeiro sãococos da palmeira babaçu (Orbinya spp), planta típica de zonas de várzeas evales de rios. O objetivo desse trabalho foi identificar e caracterizar atividadeamilásica no intestino de larva de P. nucleorum. Foram retirados o intestino delarvas de P. nucleorum, homogeneizados imediatamente em tampão fosfato 50mM pH 7,5 contendo inibidores de protease (Aprotinina 0,2 µg/mL e Benzamidina1 mM) e sacarore 250 mM e EDTA 1 mM. A fração solúvel S1 apresentou maioratividade amilásica em relação à fração precipitada P1 e análise em SDS-PAGEmostrou polipeptídios em torno de 62 kDa e entre 12 a 40 kDa nessa fração. Afração S1 apresentou máxima atividade amilásica a 50 ºC. Na presença de cálcio0,5 mm ou cloreto de sódio 14 mM, a atividade amilásica foi ativada,respectivamente, em 20 e 45 %. A preparação com sacarose e EDTA apresentoumaior atividade amilásica em relação à preparação sem sacarose e EDTA. Emambas as preparações, observou-se um aumento de atividade quantoarmazenada em geladeira, um maior aumento na preparação sem sacarose eEDTA.
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Bibliographical Information:

Advisor:Luiz Claudio Cameron; Mauricio Pereira de Sales; Milton Vieira Coelho

School:Universidade Federal de Uberlândia

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:Babaçu Atividade

ISBN:

Date of Publication:02/28/2006

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