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Avaliação de antígenos de Mycobacterium tuberculosis com potencial para uso no diagnóstico da tuberculose

by Goes Madeira, Suselaine de

Abstract (Summary)
Tuberculose, causada pela bactéria Mycobacterium tuberculosis, é uma das mais gravesdoenças infecciosas no mundo, sendo responsável por milhões de mortes. Apesardo uso da vacinação com M. bovis BCG, o número de novos casos continua elevado.Métodos imunológicos para diagnóstico de tuberculose são limitados devido àreação cruzada desencadeada pelo BCG. Novas ferramentas diagnósticaspermitiriam a detecção e tratamento de pacientes infectados antes dodesenvolvimento da doença ativa, necessitando para isso antígenos presentes emM. tuberculosis, mas ausentes na cepa vacinal. Neste sentido, esse trabalho foidesenvolvido visando à caracterização das proteínas Rv3402, Rv3404 e Rv3405,contidas na RD16, região ausente apenas M. bovis BCG Moreau, a cepa vacinalutilizada no Brasil, mas presente em todas as outras cepas de BCG e em M.tuberculosis. Os genes rv3402, rv3404 e rv3405 foram obtidos por PCR a partir de M.tuberculosis H37RV e clonados no vetor pENTR/D/Topo (Gateway System -Invitrogen) e usados para transformar Escherichia Coli Top10F. A seqüênciacodificadora de cada gene foi então transferida para o vetor de expressão pDEST17,o qual permite a fusão da proteína com uma cauda de histidina, facilitando a suapurificação. Depois de extraídos e purificados, esses plasmídios foram usados paratransformar E. coli BL21 pLysS. A purificação das proteínas foi realizada através decromatografia de afinidade. Camundongos BALB/c foram imunizados com asproteínas purificadas e o soro obtido destes animais foi utilizado para caracterizaçãodas proteínas por Western blot e ELISA. Foi possível demonstrar que as proteínassão imunogênicas e que são expressas por M. tuberculosis. As proteínas contidas naRD16 e avaliadas nesse estudo, foram quantificadas em uma concentração de 0,5mg.mL-1 para Rv3402 e Rv3404 e 0,2 mg.mL-1 para Rv3405 e foram capazes deinduzir uma resposta imune humoral específica e estatisticamente significativa emcamundongos imunizados, indicando que podem vir a ser utilizadas para odesenvolvimento de testes de imunodiagnósticos para tuberculose, visando àdiferenciação entre indivíduos vacinados e infectados com o bacilo da tuberculose.
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Bibliographical Information:

Advisor:Odir Antônio Dellagostin

School:Universidade Federal de Pelotas

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:Tuberculose IMUNOLOGIA

ISBN:

Date of Publication:12/07/2007

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