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Trypanosoma cruzi: Contribuição ao estudo da endocitose dependente e independente de clatrina em formas epimastigotas.

by Corrêa, José Raimundo

Abstract (Summary)
Endocitose em células eucarióticas é o processo de incorporação demacromoléculas por diferentes vias, com diversas proteínas associadas. Esteprocesso ocorre através do brotamento de vesículas na membrana plasmática eendereçamento destas vesículas a compartimentos endossomais no citoplasma. Ostripanossomatídeos são protozoários flagelados patogênicos de grande importânciamédica e veterinária que apresentam diferentes formas adaptativas ao longo de seuciclo de vida. Estes parasitas estão estruturalmente organizados dentro de umarcabouço de microtúbulos subpeliculares, o que dificulta invaginações demembrana na maior parte do corpo celular. Entretanto, este arcabouço édescontinuado na região da bolsa flagelar, de onde o flagelo emerge do corpo.Formas epimastigotas do Trypanosoma cruzi apresentam além da bolsa flagelar,uma segunda invaginação de membrana, o citóstoma/citofaringe. Esta estrutura ésustentada por microtúbulos especializados que participam ativamente no processode endocitose. O objetivo desta tese foi investigar as vias endocíticas presentes nosdois sítios competentes para a captação de nutrientes (bolsa flagelar e citóstoma) deepimastigotas de T. cruzi. Após incubação dos parasitas a 28oC com albumina,transferrina e LDL conjugadas a ouro coloidal e posterior processamento paramicroscopia eletrônica de transmissão (MET), vesículas endocíticas revestidascontendo albumina foram observadas brotando da bolsa flagelar. Através da análisedo conteúdo protéico dos protozoários foi detectada a expressão de clatrina,confirmada por citometria de fluxo e análise in silico da base de dados genômicos doT. cruzi. Por microscopia confocal localizou-se a clatrina na região compreendidaentre o núcleo e a bolsa flagelar dos parasitas. Como transferrina foi visualizada emvesículas sem revestimento localizadas majoritariamente no citóstoma, frações demembrana detergente-resistentes foram purificadas por fracionamento celular e oconteúdo lipídico foi analizado por cromatografia, sendo também obtidas asconcentrações de proteína e colesterol destas frações de membrana. ?Dot blots? dasfrações foram positivos para marcadores universais de jangadas de lipídios (flotilina-1 e toxina B do cólera). Por imunofluorescência co-localizou-se as marcações detransferrina e flotilina no citóstoma. Assim, propomos que a endocitose detransferrina ocorra principalmente pelo citóstoma através de um domínio demembrana detergente-resistente. Epimastigotas foram pré-tratadas com drogas queinibem seletivamente a endocitose mediada por clatrina e por cavéolas, e por drogasque interferem com o citoesqueleto. Estas células foram avaliadas quanto a suacapacidade de captar transferrina do meio. Dados de MET e citometria de fluxomostraram que a endocitose de transferrina ocorreu normalmente nas amostrasonde o brotamento de vesículas mediado por clatrina foi inibido. Por outro lado, nasamostras onde houve inibição da endocitose por cavéolas, a captação detransferrina foi significativamente reduzida. Análise da curva de crescimento deparasitas tratados demonstrou haver relação entre interferência nos domínios demembrana detergente-resistentes e sobrevivência das células. Este conjunto dedados permitiu elaborar um modelo dos mecanismos de endocitose emepimastigotas de T. cruzi.
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Bibliographical Information:

Advisor:Maurilio José Soares

School:Faculdades Oswaldo Cruz

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords: Lipídeos da Membrana Células Eucarióticas

ISBN:

Date of Publication:09/18/2007

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