Paper de la 1,25 dihidroxivitamina D3 extrarenal en larteriopatia urèmica. Efecte diferencial de lanaleg 19-nor-dihidroxivitamina D2

by Cardús Figueras, Anna

Resumen La arteriosclerosis es un proceso caracterizado por el engrosamiento y endurecimiento de la pared de las arterias. Este proceso se encuentra acelerado en pacientes con insuficiencia renal crónica (IRC). Además, estos pacientes sufren una disminución de la síntesis de 1,25-dihidroxivitamina D3 (1,25(OH)2D3) que les conduce a otras complicaciones como el hiperparatiroidismo secundario (HPT2). Por esta razón el uso de 1,25(OH)2D3 es común en el tratamiento del HPT2. El efecto de la 1,25(OH)2D3 en la calcificación de las células de músculo liso (CMLV) está bastante estudiado, pero su efecto en la proliferación no está muy claro. Analizamos el efecto de la 1,25(OH)2D3 en la proliferación de las CMLV por incorporación de BrdU y citometría de flujo. Nuestros resultados muestran que la 1,25(OH)2D3 induce la proliferación de las CMLV de una manera dosis dependiente tanto en estado quiescente como proliferativo. El efecto de la 1,25(OH)2D3 en la proliferación se correlaciona con un incremento de expresión del factor de crecimiento del endotelio vascular (vascular endothelial growth factor, VEGF). Además, al inhibir la actividad de este VEGF observamos que la proliferación inducida por la 1,25(OH)2D3 se encuentra totalmente bloqueada. A partir de estos resultados analizamos la zona promotora de VEGF y observamos la presencia de 3 zonas con secuencias muy parecidas a los elementos de respuesta de la vitamina D (VDRE) presentes en los genes diana de la 1,25(OH)2D3. A partir del análisis por Inmunoprecipitación de Cromatina (ChIP) detectamos un VDRE en el promotor del VEGF donde el receptor de la vitamina D (VDR) se une tras el tratamiento con 1,25(OH)2D3. Luego planteamos un modelo distinto para comparar el efecto de la 1,25(OH)2D3 y el 19-nor-1,25(OH)2D2 en el proceso de proliferación y de calcificación in vitro, ex vivo e in vivo en un modelo de ratas IRC. Observamos un incremento de la proliferación en las CMLV, los anillos de arteria aorta y en los animales tratados con 1,25(OH)2D3 pero no en los tratamientos con 19-nor-1,25(OH)2D2. También determinamos el efecto de ambos tratamientos en la presión arterial y ambos tratamientos incrementan la TAS de manera significativa, en cambio la 1,25(OH)2D3 no aumenta la TAD de la misma manera que el 19-nor-1,25(OH)2D2. La presión del pulso incrementa significativamente en los animales tratados con 1,25(OH)2D3. Posteriormente, analizamos las diferencias en la calcificación en ratas tratadas con los dos compuestos y al analizar el calcio y fosfato del suero observamos un incremento significativo del calcio en los dos tratamientos. También determinamos la ratio media/lumen donde podemos observar un incremento significativo en las ratas tratadas con 1,25(OH)2D3. A continuación, estudiamos las áreas calcificadas de la arteria aorta y determinamos un claro incremento en las ratas tratadas con 1,25(OH)2D3 que no es observado en las tratadas con 19-nor-1,25(OH)2D2. Finalmente, analizamos el proceso de calcificación in vitro en las CMLV y observamos un incremento claro del contenido de calcio en estas células después del tratamiento con 1,25(OH)2D3 que no fue observado en el tratamiento con 19- nor-1,25(OH)2D2. También observamos un incremento mayor en las células tratadas con 1,25(OH)2D3 de la expresión de RANKL, una citoquina esencial en el proceso de osteoclastogénesis, secretada por los osteoblastos (en nuestro caso probablemente por células parecidas a osteoblatos). Por lo tanto, nuestros resultados sugieren que la 1,25(OH)2D3 estimula la proliferación mediante el factor de crecimiento VEGF y la calcificación de las CMLV. En cambio el 19-nor-1,25(OH)2D2v solamente presenta un leve efecto en la calcificación.