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Mecanismo de regulación de NOR-1 en células vasculares: Implicaciones de las LDL y de la vía de síntesis de isoprenoides

by Crespo Asensio, Francisco Javier

Abstract (Summary)
RESUMEN: NOR-1 (Neuron-derived orphan recetor-1) es un receptor nuclear huérfano involucrado en la proliferación y migración de las células musculares lisas (CML) inducidas con suero. En la aterosclerosis es clave la activación de las células vasculares (CML y células endoteliales) por lipoproteínas de baja densidad (LDL) y mitógenos. Los mecanismos moleculares a través de los cuales se produce esta activación se conocen sólo parcialmente. El objetivo de esta tesis es estudiar si NOR-1 está implicado en la activación de las células vasculares inducida por LDL y el factor de crecimiento del endotelio vascular (VEGF), y si la expresión de este gen puede ser regulada por fármacos antiateroscleróticos. Utilizando técnicas de RT-PCR semi- y cuantitativa (PCR en tiempo real) observamos que la expresión de NOR-1 es inducida por LDL en CML y en pared arterial de cerdos hipercolesterolémicos y que los inhibidores de la HMG-CoA reductasa (estatinas) son capaces de inhibir esta inducción. El efecto de las estatinas en las células es revertido por el mevalonato y el geranilgeraniol, pero no por el farnesol. Al inhibir RhoA con simvastatina, exotoxina C3 y toxina B o al inhibir la actividad de Rho Kinase (ROCK, un efector de RhoA) con Y-27632, se inhibe la expresión de NOR-1 inducida por LDL. En el mismo sentido en experimentos de transfección de CML de rata la activación del promotor de NOR-1 inducida por LDL es inhibida por la simvastatina y también al cotransfectar las células con un dominante negativo de RhoA (RhoAT19N). El análisis por Western blot de la proteína de CML inducidas con LDL muestra que un factor de transcripción que regula la actividad del promotor de NOR-1 (CREB) se activa (fosforilación en serina 133), y que dicho efecto es inhibido por simvastatina, exotoxina C3 e Y-27632. También observamos que un promotor formado por cuatro elementos CRE consenso es activado por LDL, efecto que es inhibido al cotransfectar las células con RhoAT19N. Además las LDL son capaces de activar a SMemb, gen regulado por elementos CRE, y la simvastatina de inhibe este efecto. Por otro lado, en estudios con células endoteliales de vena del cordón umbilical humanas (HUVEC), VEGF induce la expresión de NOR-1. La inhibición de la expresión de NOR-1 con oligonucleótidos antisentido dirigidos contra el inicio de traducción de NOR-1, disminuye el efecto proliferativo y migratorio del VEGF en estas células. Estos resultados muestran que NOR-1 es inducido en CML por LDL a través de un mecanismo dependiente de la activación de CREB y de la vía de RhoA/ROCK. Además NOR-1 participa en la migración y proliferación inducida por VEGF en células endoteliales. NOR-1 podría ser clave en el papel antiaterogénico que desempeñan las estatinas, y podría ser una potencial diana terapéutica para regular la aterosclerosis y la angiogénesis.
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Bibliographical Information:

Advisor:Badimón, Lina; Martínez González, José

School:Universitat de Barcelona

School Location:Spain

Source Type:Master's Thesis

Keywords:bioquímica i biologia molecular fac

ISBN:

Date of Publication:07/21/2005

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