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MIP-1ß (CCL4): Estudio de su regulación transcripcional y evaluación de las implicaciones del polimorfismo a nivel del locus B

by Adreani Rizo, Patricia

Abstract (Summary)
Las Quimiocinas constituyen un pequeño grupo de moléculas estructuralmente relacionadas, que se caracterizan por regular el tráfico de varios tipos de leucocitos en condiciones fisiológicas y patológicas. En general las quimiocinas se han clasificado en cuatro grupos, en función de los residuos de cisteína que se encuentran en el extremo N-terminal de la proteína madura. Los cuatro grupos son: Las CXC quimiocinas ó a-quimiocina, las CC quimiocinas ó b-quimiocinas, las C quimiocinas ó g-quimiocina y finalmente la CX3C quimiocina ó d-quimiocina. Dentro del grupo de las b-quimiocinas, se encuentran MIP-1a y MIP-1b, que se localizan en el cromosoma 17q 11.2. Las quimiocinas ejercen sus efectos biológicos, a través de la unión con sus receptores que se encuentran expresados en la superficie de diversos grupos leucocitarios. Se ha descrito la utilización de tres receptores para MIP-1b: CCR5, CCR8 y CCR9, siendo el CCR5 el que le otorga propiedades antivirales, ya que éste representa uno de los correceptores del VIH-1. Se ha descrito que MIP-1b ésta codificada por dos loci, el Locus A y el locus B; y que éste último define un polimorfismo en la quimiocina. Esta forma polimórfica se caracteriza por la deleción de 15 pb en el exón 3, que se origina a partir de un cambio de base (A260 G), provocando que se sintetice una proteína con 5 aminoácidos menos. Para determinar la incidencia de este polimorfismo dentro de la población sana, se estudió la distribución alélica en 200 individuos sanos a través de la técnica de PCR-SSP, confirmadas posteriormente por las técnicas de PCR-SSO post-hibridación y secuenciación; revelando que la frecuencia del alelo canónico representa un 83,5%, mientras que la frecuencia del alelo polimórfico representa un 16,5%. Así mismo el estudio fue realizado en una población de pacientes con enfermedades tiroideas autoinmunes, pacientes diabéticos, pacientes con hepatitis C, observando que existe una correlación entre la frecuencia genómica y la frecuencia alélica de estos pacientes respecto a la población normal. Sin embargo, en los pacientes con VIH se observaron diferencias claras y estadísticamente significativas respecto a los individuos sanos. Para estudiar los niveles de expresión de MIP-1a y de MIP-1b, utilizamos un protocolo que, aprovechando pequeñas diferencias a nivel de la secuencia nucleotídica, combina RT-PCR y restricción con MspI para estimar semicuantitativamente los niveles de ARNm de los loci codificantes para cada una de las dos quimiocinas. El aspecto más relevante de esta técnica, es el uso de un fragmento de ADN recombinante, que actúa de Estándar Interno, tanto para MIP-1a como para MIP-b, a la vez que contiene un lugar de restricción para MspI. De esta manera actúa como control de la amplificación y de la digestión. Esta metodología se aplicó para determinar las posibles diferencias que pudieran existir en los niveles de expresión de los loci A y B de MIP-1b, en la línea celular U-937 tras su estimulación con PMA, LPS e ionomicina, así como también entre individuos sanos y pacientes VIH+ (de diferentes genotipos) en PBMCs y linfocitos T CD8+, estimulados con PHA e IL-2. El estudio mostró que los loci A y B se regulan de manera diferente en las células U-937 y las cinéticas de expresión de mRNA son equivalentes en PBMCs y linfocitos T CD8 de pacientes VIH+ y en controles. En términos generales el locus B contribuye de manera minoritaria a la síntesis de mRNA de MIP-1b y la cinética de inducción del mRNA de los linfocitos T CD8, se ve retrasada en heterocigotos y homocigotos (bb). Por otro lado, los niveles de expresión del receptor CCR5 en linfocitos T CD4+ son diferentes a los que presentan los controles. Finalmente, podemos concluir que MIP-1b ejerce un efecto diferencial sobre sus células diana debido a las distintas iso- y alo-formas que presenta.
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Bibliographical Information:

Advisor:Juan Otero, Manuel

School:Universitat Autónoma de Barcelona

School Location:Spain

Source Type:Master's Thesis

Keywords:408 departament de biologia cel lular i fisiologia

ISBN:

Date of Publication:10/10/2002

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