Efeito da peçonha de Bothrops moojeni sobre formas promastigotas de Leishmania spp

by Castilhos, Patrícia de

O estudo do tratamento de doenças infecciosas vem desenvolvendo ferramentasalternativas e muitas substâncias estão sendo testadas no tratamento de parasitoses, comoLeishmanioses. Com esta proposta, a peçonha de serpentes tem sido estudada como droga capazde alterar a viabilidade de parasitos. Neste trabalho, foi avaliado o efeito da peçonha de Bothropsmoojeni e suas Frações protéicas na viabilidade, na produção de NO, na infectividade e nasproteínas de promastigotas de Leishmania ?in vitro?. A peçonha de Bothrops moojeni foifracionada em cinco Frações (E1 a E5) por cromatografia de troca iônica e usadas no tratamentode promastigotas de L. (L.) amazonensis e L. (V.) braziliensis. A viabilidade foi analisadautilizando-se o MTT como substrato e a produção de óxido nítrico foi determinada nosobrenadante das culturas dos parasitos pelo método de Griess. Foi observado que a Fração E5inibe fortemente a produção de NO em diferentes concentrações em L. amazonensis, enquantoem L. braziliensis a produção de NO apresentou aumento. Também foi observado que a peçonhainibe a viabilidade de ambos parasitos de forma dose-dependente, enquanto a Fração E5 inibe aviabilidade de L. amazonensis. Além disso, os parasitos tratados com peçonha apresentaram aproteína de 64 kDa de L (L.) amazonensis aparentemente degradada em duas outras proteínas de56 e 51 kDa respectivamente. Quando Leishmania spp foi tratada com Fração E5 e comanfotericina B não foi observado nenhuma alteração no perfil eletroforético dos parasitos. E apósos estudos com a Fração E5 obtida na cromatografia de troca iônica, a mesma foi eluída emcromatografia de exclusão molecular e foram obtidos seis novos picos de Frações protéicas(E5G1 a E5G6). Estes foram testados na viabilidade celular de Leishmania (L.) amazonensis e oparasito somente foi sensível às subFrações E5G1 (amp;#8805; 0.156 amp;#956;g) e E5G5 (amp;#8805; 0.313amp;#956;g). Adicionalmente foram analisados o efeito da peçonha de Bothrops moojeni e da Fração E5 naprogressão da lesão de camundongos BALB/c infectados por L. amazonensis. Durante o períodode acompanhamento da evolução da lesão (6 semanas), verificou-se que a espessura das patasdos animais infectados com parasitos tratados até este período, não aumentou em relação à patacontralateral não infectada. Assim, demonstramos que peçonha de Bothrops moojeni e suasFrações protéicas alteram o perfil protéico e reduzem a viabilidade celular e a produção de NOpor Leishmania, levando a diminuição da infectividade dos parasitos tratados, observados pelaausência de lesão nas patas dos camundongos inoculados com parasitos tratados com asrespectivas drogas.