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Efecto in vitro e in vivo de un inmunomodulador compuesto por LPS de E. coli y Propionibacterium granulosum sobre el sistema inmune del cerdo

by Pappaterra Mendoza, Gustavo José

Abstract (Summary)
La inmunomodulación se define como la modificación de la respuesta inmune por medio de la administración de sustancias que poseen la capacidad de regular el sistema inmunitario. INMD es un inmunomodulador compuesto por una combinación de LPS detoxificado de E. coli y células inactivadas de Propionibacterium granulosum, que ha demostrado tener un efecto modulador sobre el sistema inmune del cerdo. En el presente trabajo hemos realizado diversos ensayos in vitro e in vivo con el objetivo de evaluar los efectos que produce este compuesto sobre el sistema inmune del porcino. Se realizaron ensayos in vitro para determinar la acción de INMD o sus componentes por separado sobre la producción o expresión de citoquinas en macrófagos alveolares y células mononucleares de sangre periférica, la activación de la fagocitosis en neutrófilos polimorfonucleares, la activación de linfocitos a través del estudio del receptor para IL-2 (CD25) y la expresión del complejo mayor de histocompatibilidad tipo-II (MHC-II) en macrófagos alveolares. Observamos que los macrófagos alveolares expresaron IL-1, IL6, IL-12 y produjeron TNF-a, pero no se detectó IL-10, mientras las células mononucleares de sangre periférica expresaron IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, IL-12 y produjeron INF-g. En la fagocitosis, observamos incremento del número de células que se activaron y fagocitaron. Este efecto estuvo correlacionado con P. granulosum. Observamos que INMD y sus componentes por separado indujeron la expresión de MHC-II en macrófagos alveolares, tanto en aquellos infectados con el virus de la enfermedad de Aujeszky como en las células que no infectadas. Para CD25, observamos que INMD y sus componentes por separado fueron capaces de inducir la expresión de esta molécula que nos indica que se produjo la activación de las células mononucleares de sangre periférica. En este caso, la máxima expresión de CD25 se observó con INMD tanto en células infectadas con el virus de la enfermedad de Aujeszky como en aquellas no infectadas. Se realizaron dos pruebas in vivo. En la primera de ellas se evaluó el efecto de la administración de INMD utilizado como coadyuvante a la vacunación contra el virus de la enfermedad de Aujeszky. Se utilizaron 85 cerdos convencionales divididos en dos grupos (grupo A= 43 y grupo B= 42), que fueron vacunados dos veces contra el virus de la enfermedad de Aujeszky. El grupo B recibió simultáneamente con la primera dosis vacunal, una dosis intramuscular de INMD (20 mg/ml de LPS y 250 mg/ml de P. granulosum). Se realizaron tres sangrados, antes de la primera vacunación y la revacunación, y cinco semanas posteriores a esta. Los sueros se analizaron para anticuerpos frente a gE y gB del virus de la enfermedad de Aujeszky, inmunoglobulinas totales (IgG1, IgG2), inmunoglobulinas especificas (IgA, IgG1, IgG2) para el virus de la enfermedad de Aujeszky, linfoproliferación y títulos neutralizantes frente al virus de la enfermedad de Aujeszky. Al inicio del estudio, el 97,6% de los animales del grupo A y 100% del grupo B, presentaban anticuerpos frente gB, mientras que el 11,6% y 19% de los animales de los grupo A y B, respectivamente, presentaban anticuerpos frente a gE, todos de origen maternal. Al final del ensayo, el 96,4% de los cerdos del grupo A y el 87,1% del grupo B eran gB+ y ninguno presentó anticuerpos frente a gE. Tras la primera vacunación y la aplicación de INMD, los animales del grupo B presentaron niveles totales de IgG1 e IgG2 superiores que los animales del grupo A (p<0,01), diferencias que desaparecieron tras la revacunación. Si bien entre estos isotipos se observó la misma tendencia en los anticuerpos específicos frente al virus de la enfermedad de Aujeszky, esta diferencia no fue significativa. Con relación a las IgA, se observó que tras la revacunación el 38,48% de los animales del grupo B presentaban títulos £1:40, mientras que en el grupo A se observaron estos títulos en el 14,81% de los cerdos (p<0,01). En los ensayos de linfoproliferación no se observaron diferencias significativas entre grupos. En cuanto a los títulos de anticuerpos neutralizantes, se observó una respuesta humoral primaria superior en el grupo B con respecto al grupo A (p<0,005), diferencia que desapareció tras la revacunación. Así mismo, en la respuesta primaria el 56,7% de los cerdos del grupo A presentaban títulos £1:4, mientras que entre el grupo B el 25,6% de los animales presentaban este comportamiento (p<0,05). En un segundo ensayo realizado in vivo, se evaluaron los efectos adversos que pudieran ocasionar la aplicación de INMD a una dosis superior a la recomendada. Se utilizaron ocho cerdos de alta sanidad que se dividieron en tres grupos: Grupo A: INMD (1,2 mg/kg P.V. de LPS y 16 mg/kg P.V. de P. granulosum), Grupo B: INMD (2,6 mg/kg P.V. de LPS y 33 mg/kg P.V. de P. granulosum), Grupo C: solución salina estéril. A los tiempos 0, 1, 2, 4, 6 y 24 horas se realizó el sangrado, para determinar los niveles de TNF-a, la medición de la temperatura corporal y evaluación clínica Ninguno de los animales presentó signos clínicos relacionados con la aplicación de LPS y la liberación de niveles altos de citoquinas. De estos resultados podemos concluir que INMD ejerce su acción sobre el sistema inmunitario induciendo la expresión de citoquinas, incrementando la capacidad fagocítica de los PMN y estimulando la expresión de MHC-II y CD25. Estos efectos pueden contribuir sustancialmente al mejoramiento del proceso de respuesta inmune del cerdo en enfermedades y vacunaciones.
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Bibliographical Information:

Advisor:Mateu, Enric

School:Universitat Autónoma de Barcelona

School Location:Spain

Source Type:Master's Thesis

Keywords:457 departament de salut i anatomia animals

ISBN:

Date of Publication:09/25/2002

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