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DEVELOPMENT OF SPECTROFLUORIMETRIC METHODS FOR DETERMINATION OF ERYTHROMYCIN AND KANAMYCIN AND THEIR APPLICATION IN THE YELLOW FEVER VACCINE DESENVOLVIMENTO DE MÉTODOS ESPECTROFLURIOMÉTRICOS PARA A DETERMINAÇÃO DE ERITROMICINA E CANAMICINA E APLICABILIDADE NA VACINA CONTRA A FEBRE AMARELA

by LOURDES MENDES, VIRGINIA DE

Abstract (Summary)
Os antibióticos eritromicina e canamicina, pertencentes às classes dosmacrolídeos e aminoglicosídeos respectivamente, têm sua importância comoagentes preservativos no processo de preparação e durante o processo deutilização da vacina contra a febre amarela - apresentação de cinco doses -produzida no Instituto de Tecnologia em Imunobiológicos, Bio-Manguinhos,FIOCRUZ, RJ. Este trabalho propõe apresentar duas novas abordagens para adeterminação espectrofluorimétrica desses antibióticos, considerando odesempenho, inclusive com relação à seletividade, na análise dessa matrizespecífica (vacina). Um estudo preliminar do comportamento luminescente(fosforescência e fluorescência) dessas substâncias foi realizado em diferentescondições experimentais a fim de encontrar as que permitissem odesenvolvimento dos métodos analíticos. Para a eritromicina, que não apresentouluminescência nativa, foi utilizado um procedimento de derivação fotoquímica desoluções do analito preparadas em meio contendo ácido sulfúrico. Como resultadoobteve-se um foto-produto que apresentou fluorescência em 412/465 nm. Ascondições experimentais foram otimizadas visando a maximização desse sinalfluorescente. Nesse caso, foram estudados o tempo de irradiação com UV, o tipo ea concentração do ácido utilizado, o tempo e a temperatura de aquecimento. Ométodo foi parcialmente validado apresentando limites de detecção e dequantificação iguais a 0,25 µg mL-1 e 0,85 µg mL-1 respectivamente. A faixalinear do método estendeu-se até 200 µg mL-1 e os parâmetros de precisão erobustez foram bastante satisfatórios. O método foi aplicado na análise de umasimulação de vacina contra a febre amarela e na análise de medicamentoscomerciais com um percentual de recuperação entre 98,2 e 105,2 %. Ametodologia desenvolvida para a canamicina, que também não apresentou fluorescência natural, baseou-se na reação de oxirredução deste composto com oCe (IV) produzindo o Ce (III), que é uma espécie fortemente fluorescente(255/360 nm). As intensidades dos sinais fluorescentes medidos no parexcitação/emissão do Ce (III) foram diretamente proporcionais às concentraçõesde canamicina. As condições para a realização da reação foram estudadas,avaliando a quantidade de Ce (IV), a concentração e tipo de ácido usado no meioreacional e o tempo e temperatura de aquecimento. A ampla faixa linear (até 1000µg mL-1) foi obtida, com limites de detecção e quantificação de 1,22 µg mL-1 e4,08 µg mL-1, respectivamente. O percentual de recuperação obtido na análise davacina diluída foi de 109,8 % e em amostra diluída de urina enriquecida com oanalito foi de 103,4 %.
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Bibliographical Information:

Advisor:MARCIA ARISSAWA; MARCIA ARISSAWA; CLAUDIA HAMACHER; RICARDO QUEIROZ AUCELIO; RICARDO QUEIROZ AUCELIO; ADERVAL SEVERINO LUNA

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Source Type:Master's Thesis

Keywords:VACINA FEBRE AMARELA

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Date of Publication:04/29/2005

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