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ANÁLISE BIOINFORMÁTICA DE TRANSCRITOS DAGLÂNDULA DE VENENO DA ARANHA ? MARROMLoxosceles intermedia E CONSTRUÇÃO DEBACULOVÍRUS RECOMBINANTES COMO VETORESDE TOXINAS INSETICIDAS

by de Castro, Cibele Soares

Abstract (Summary)
Neste trabalho, objetivando a caracterização molecular de transcritos da glândula deveneno da aranha-marrom Loxosceles intermedia para a ampliação do banco de dados detoxinas, 268 seqüências foram agrupadas em 136 singlets e 33 consensos. Estasseqüências foram submetidas à anotação gênica para que fossem identificadas por meio debuscas de similaridade contra diferentes bancos de dados. Em seguida, foram classificadasem categorias funcionais, analisadas quanto a sua função biológica e, quando possível,modeladas por homologia para que verificássemos sua provável estrutura tridimensional.Além disso, a fim de produzir bioinseticidas de alta eficiência e especificidade,trabalhamos com toxinas de atividade letal para insetos de importância agrícola.Recentemente, a partir da purificação do veneno bruto de L. intermedia e da construção deuma biblioteca de cDNA das glândulas de veneno desta aranha, nosso grupo caracterizoutoxinas com forte ação inseticida em larvas de Spodoptera frugiperda, a lagarta-do-cartuchodo milho. Devido às dificuldades para se obter do veneno bruto as toxinas identificadas porbiologia molecular, o uso de sistemas de expressão heterólogos torna-se necessário tantopara o estudo dos genes isolados dessas toxinas quanto para a sua obtenção em grandesquantidades.Um dos sistemas heterólogos de controle a pragas mais estudados em nível nacionale internacional é aquele que utiliza baculovírus no combate a diversas pragas agrícolas. Osistema baculovírus supera em vários aspectos os sistemas tradicionais de inseticidasquímicos, sendo considerado por diversos autores como seguro ao meio ambiente e aohomem e, também, apresentando potencialmente um custo final por hectare menor do que odos inseticidas químicos.Assim, realizamos - através da subclonagem em vetores de transferência do sistemade expressão baculovírus - a inserção dos genes das toxinas inseticidas LiTx1, LiTx2 e LiD1(previamente identificadas a partir da glândula de veneno de L. intermedia) ao genoma dobaculovírus AcMNPV. O sucesso da construção dos vírus recombinantes foi verificado apósinfecção de células de inseto e também por PCR. A expressão das toxinas LiTx1, LiTx2 eLiD1 foi verificada por RT-PCR, SDS-PAGE e Western Blotting. Bioensaios com os vírusrecombinantes LiTx1 e LiTx2 em larvas de S. frugiperda demonstraram sua eficáciainseticida, com diminuição do tempo de vida desta lagarta, quando comparada aos vírusselvagens.Acreditamos que os baculovírus recombinantes aqui gerados poderão permitir aexpressão em larga escala das toxinas LiTx1, LiTx2 e LiD1 de L. intermedia. Issopossibilitará a realização de estudos de caracterização dessas toxinas inseticidas quantoaos seus mecanismos de ação e permitirá também sua utilização como ferramentas napesquisa básica para estudos de canais iônicos e outros processos fisiológicos.
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Bibliographical Information:

Advisor:Evanguedes Kalapothakis; Eládio Flores Santos; Rogélio Lopes Brandão; Ieso de Miranda Castro

School:Universidade Federal de Ouro Prêto

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:Biologia molecular Aracnídeo venenoso Inseticidas BIOLOGIA MOLECULAR

ISBN:

Date of Publication:12/14/2005

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