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Caracteristicas fenotipicas e funcionais das celulas Natural Killer uterinas de camundongos

by Paffaro Junior, Valdemar Antonio

Abstract (Summary)
As células natural killer uterinas (NKu) constituem uma população linfocitária transitória, presente no útero de humanos e roedores durante a gestação. O ambiente uterino, no início da gestação, parece ser determinante na migração e diferenciação, assim como, na supressão da atividade citolítica destas células, que atuam em outras localidades na resposta imune inata. Porém, os fatores ou os mecanismos envolvidos nestes processos celulares, das NKu, não foram ainda elucidados. As características fenotípicas e constitutivas asseguram a similaridade das NKu com as NK circulantes (NKc), porém, diversos ensaios apontam a primeira como sendo uma provável subclasse de células NK. No presente estudo, estabeleceu-se um método cito químico utilizando-se a lectina DBA (Dolichos biflorus) como um marcador altamente seletivo para as células NKu de camundongos, que permite distingui-Ias das células NK circulantes e das demais populações linfocitárias, por não apresentar reatividade cruzada. Com este marcador, foi possível identificar morfologicamente os subtipos correspondentes aos estágios de maturação, bem como, estabelecer de forma precisa a incidência e localização das NKu no útero ao longo da gestação. Ao contrário dos imunomarcadores utilizados até então, que apresentavam limitações (restritas a algumas linhagens de camundongos, ou que reconheciam apenas as formas maduras ou imaturas), a lectina DBA mostrou ser um marcador universal para as células NKu de camundongos, além de reagir com formas imaturas e plenamente diferenciadas destas células. Com o intuito de se elucidar a ação do estrógeno diretamente sobre as células NKu, utilizou se animais geneticamente modificados juntamente com métodos imunocitoquímicos e moleculares para identificar a possível expressão de receptores de estrógenos (ERa e ERJ3) nestas células. A medula óssea de animais deficientes em receptores de estrógenos a e J3 (ER-KO ae 13) foi transplantada em camundongos imunodeficientes B6-Rag-2-/- /yc-/- (T,B-, NK} O isolamento e purificação das células Nku pelo método lectina DBA-biomagnético, tornou-se possível após ter sido constatado que a mesma reage de forma específica com o glicoconjugado presente na superfície das células NKu. Os testes de RT-PCR realizados com as NKu isoladas demonstraram a ausência de receptores de estrógeno (X e 13 nas células NKu de camundongos, revelando que o hormônio estrógeno não seria o indutor que atua diretamente na migração, proliferação ou diferenciação destas células no ambiente uterino Com o fito de investigar se as NKu constituem um subtipo especializado de células NK, avaliou-se as expressões dos genes de 14 receptores LY49 e do DAP12, através do RT-PRC em tecidos mesometriais dissecados de camundongos virgens, prenhes, normais e geneticamente modificados deficientes em linhagens de linfócitos. Úteros virgens de C57Bl/6J (B6), randombred (predominante H-2b) scid/scid, B6-IL-1Y/- e B6 nu/nu expressaram DAP12 e um repertório parcial de Ly49. A prenhez induziu a expressão de receptores inibitórios adicionais em todas as linhagens estudas. No útero de camundongo B6 virgem os receptores de ativação L Y 49D e L Y 49H foram co expressos com os inibitórios L Y49 I, J e Q. No início da gestação (dg6), foi observada a expressão de genes para um repertório extenso de Ly49, que prossegue até a metade da gestação, os quais devem estar relacionados com a diferenciação e comportamento das NK no útero. O conjunto destes experimentos e os respectivos resultados foram organizados em três capítulos distintos, redigidos na forma de três artigos científicos já submetidos para publicação em revistas especializadas da área. Saliente-se que partes deste trabalho foram desenvolvidas no laboratório da Profa. Dra. Bárbara Anne Croy, University of Guelph, ON, Canada
Bibliographical Information:

Advisor:Aureo Tatsumi Yamada; Paulo Pinto Joazeiro; Aureo Tatsumi Yamada [Orientador]; Maria Angelica Miglino; Paulo Maria Ferreira de Araujo; Paulo Alexandre Abrahamsohn; Luis Antonio Violin Dias Pereira; Fernando Ferreira Costa; Maria Celia Jamur

School:Universidade Estadual de Campinas

School Location:Brazil

Source Type:Master's Thesis

Keywords:reprodução linfocitos utero

ISBN:

Date of Publication:01/31/2003

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