Borreliosis de Lyme: estudio de posibles vectores ixódidos y evaluación de métodos de diagnóstico microbiológico.

by Navarro García, Amanda Estrella

RESUMEN Zoonosis causada por bacterias del género Borrelia. por la transmisión accidental por garrapatas infectadas. El género Borrelia. pertenece a la familia Spirochateaceae, y son 4 las causales de la borreliosis de Lyme, asociadas en el complejo Borrelia burgdorferi sensu lato ( B. burgdorferi sensu stricto,B. afzelii, B. garinii y B. Valaisiana) La adherencia de 48 horas es el mínimo exigido, para la inoculación de Borrelia burgdorferi sensu lato Diagnóstico de borreliosis de Lyme: Diagnóstico directo a partir de diferentes muestras clínicas al observarse fácilmente empleando colorantes convencionales, Cultivo enmedio de BSK, técnicas de amplificación y la detección mediante sondas de ADN específico. En el diagnóstico indirecto se emplean como métodos de referencia, el enzimoinmunoanálisis como prueba de cribado y la inmunotransferencia para la confirmación. Objetivos: 1.- Obtener y caracterizar ixódidos procedentes de distintas áreas de la provincia de Valencia. 2.- Determinar la presencia de Borrelia burgdorferi sensu lato en los ixódidos obtenidos. 3.- Seleccionar muestras clínicas con resultado en la prueba de cribado EIA positivo. 4.- Analizar dichas muestras mediante otras pruebas específicas y confirmatorias así como evaluar la presencia de reactividad cruzada con otros procesos nosológicos. 5.- Estudiar las características clínicas y evolución de los pacientes con marcadores serológicos sugestivos de borreliosis de Lyme así como evaluar su significación. Materiales y métodos. Obtención y caracterización de ixódidos, se procedió a la detección de Borrelia burgdorferi mediante estudio microscopico, cultivo y PCR. La selección de muestras clínicas, se realizó mediante el método de cribado EIA, y el estudio de reactividad cruzada y su confirmación mediante pruebas específicas. Y por último, se realizó el análisis de signos y síntomas clínicos y su relación con las resultados serológicos. Se realizaron macerados y disecciones a los que se practicó un estudio microscópico y cultivo en BSK II. Ya en el 2º periodo, se procedió a la detección de B. Burgdorferi mediante técnicas de PCR. anidado, utilizando 2 parejas de iniciadores del gen de Osp A, según el método de Guttman y colaboradores, que permiten obtener en la 2ª amplificación, un fragmento de 345 pares de bases. Para el gen de la flagelina, utilizamos igualmene 2 parejas de iniciadores del gen de la flagelina, según el método de Lebech y colaboradores. que permiten obtener en la 2ª amplificación, un fragmento de 275 pares de bases. Para el estudio serológico, se utilizó en primer lugar un método de cribado EIA IgM-IgG Sistema VIDAS LYT (de bioMèrieux) y un método complementario IFI Lyme Spot (también de bioMèrieux) que determina anticuerpos de clase IgM e IgG por separado. Como método confirmatorio, se utilizó la inmunotransferencia B. burgdorferi cepa B31 (de MarDx Diagnostic) y B. garinii genogrupo 2 (de Gull Laboratories). La reactividad serológica cruzada, se llevó a cabo frente a Treponema pallidum, Coxiella burnetii, Rickettsia conori y Brucella mellitensis, virus de Epstein-Barr, Citomegalovirus y virus de la inmunodeficiencia humana. La población de pacientes se correspondió con los atendidos en el área del HGUV Conclusiones: 1.-La colección e identificación de garrapatas ixódidas procedentes de diferentes áreas de la provincia de Valencia, ha revelado la existencia de cinco géneros, con siete especies distintas. Ninguno de ellos, clasificado como Ixodes ricinus, reconocido principal vector de la borreliosis de Lyme. 2.-En ninguna de las garrapatas estudiadas se ha identificado una espiroqueta compatible con Borrelia burdorferi sl. u otra especie de Borrelia asociada a un cuadro de borreliosis de Lyme. 3.-Consideramos que el método más adecuado para el estudio microbiológico en los ixódidos, es la disección de las garrapatas con extracción de sus estructuras glandulares e intestinos medios. El uso de ejemplares macerados para detección por métodos moleculares es desaconsejado por la probable inhibición de la amplificación del ADN específico. 4.-El método de enzimoinmunoanálisis como prueba de cribado, selecciona una población de pacientes con características clínicas muy variables, pero también un grupo de pacientes con manifestaciones características y con una concreta evolución clínica, que sustentan la existencia de casos probables de borreliosis de Lyme. 5.-La titulación de los anticuerpos específicos de clase IgM e IgG mediante inmunofluorescencia y los criterios establecidos para la interpretación de las pruebas confirmatorias de inmunotransferencia con antígenos de B. burgdorferi y B. garinii, se muestran escasamente rentables en nuestro medio, ya que no permiten confirmar ni descartar la existencia de la enfermedad en el grupo de pacientes estudiados. Todo lo cual nos permite considerar la necesidad de un mejor estudio epidemiológico y clínico de los casos sospechosos de borreliosis de Lyme, y particularmente el desarrollo de criterios de diagnóstico microbiológico que se adecuen al perfil de la enfermedad en nuestra área.