Details

<No Title Provided>

by Vega, Mireille

Abstract (Summary)
La structure secondaire de la lipoxygenase (LOX) de soya purifiée commerciale de type I-B, de même que son immobilisation et sa biocatalyse en milieu de solvant organique (OSM), ont été investiguées. Les spectres infrarouges de transformée de Fourier (FT-IR) de la LOX obtenus en chloroforme, méthanol et acétonitrile ont montrés une bande d'absorption à 1617 cm-1 qui indique une agrégation significative de protéines, tandis que les spectres de la LOX en hexane et octane ont montrés sensiblement moins de formation d'agrégats. Les études infrarouges en Variation-Température de la lipoxygénase dans le D2O ont également démontrées que la structure prédominante en alpha-hélices de la protéine subit une transition irréversible, à et au-dessus de 65 Celsius, vers les beta-feuillets intermoléculaires. La biocatalyse de la LOX de soya libre et immobilisée (LOXi; EupergitC250L/EDA) a été étudiée dans différents mélanges d'hexane et de cosolvent sélectionné (95:5, v/v). Les résultats ont dévoilé des augmentations de 1.5 et 1.6 fois de l'activité enzymatique de la LOX libre et immobilisée, respectivement, en utilisant un mélange d'hexane et de 1,4-dioxane par rapport à celui en hexane. Pour déterminer la production enzymatique des hydroperoxides d'acide linoléique en OSM, la méthode par oxydation ferreuse avec l'orange de xylenol (FOX) a été optimisée. Une augmentation de la proportion de méthanol dans le réactif de FOX de 0 à 75% a eu comme effet une augmentation de 93% des coefficients d'absorption molaires à 560 nm. De plus, quand l'acide perchlorique a été employé, la source des ions ferreux et la présence de la LOX dénaturée n'ont eu que peu d'effet sur la sensibilité de la méthode de FOX tandis que la sensibilité a diminué de 40 et de 46%, respectivement, avec l'utilisation de l'acide sulfurique pour ces mêmes interférences. En outre, l'immobilisation d'un extrait enzymatique enrichi de Penicillium camemberti, contenant les activités de la LOX et de l'hydroperoxide lyase (HPL), et sa biocatalyse en OSM ont été étudiées. L'efficacité d'immobilisation la plus élevée (173.9 et 694.4% pour la LOX et la HPL, respectivement) a été obtenue avec EupergitC250L non modifié. Une augmentation de la stabilité thermique par l'immobilisation de l'extrait enzymatique enrichi sur EupergitC250L des activités de la LOX et de la HPL a aussi été observée. L'inactivation thermique de la LOX en OSM n'a pas suivi un comportement cinétique de premier ordre; celle de la HPL l'a fait. Par contre, la biocatalyse de la LOXi et de la HPLi en OSM a eu comme conséquence une augmentation de leur activité enzymatique. L'utilisation de 60% d'isooctane (v/v) dans le milieu de réaction a augmenté l'activité de HPLi par plus de 5 fois par rapport à l'activité observée dans le milieu aqueux. L'activité spécifique de la LOXi a augmentée jusqu'à un maximum 7.73 nmol HPOD/mg protéïne/min avec l'augmentation de la concentration en tétradécane jusqu'à 20% (v/v) dans un système micellaire ternaire. De même, l'addition de tétradécane dans le milieu de réaction a augmenté l'activité de HPLi de 17% par rapport à celle dans le milieu composé à 60% d'isooctane sans tétradécane.
This document abstract is also available in English.
Bibliographical Information:

Advisor:Selim Kermasha (Supervisor)

School:McGill University

School Location:Canada - Quebec / Québec

Source Type:Master's Thesis

Keywords:agriculture food science and technology

ISBN:

Date of Publication:01/01/2008

© 2009 OpenThesis.org. All Rights Reserved.